影響革蘭氏染色方法的因素
影響革蘭氏染色方法的因素:
操作因素
1、涂片太厚 在涂片a時細(xì)菌挑的太多,沒法分開,在脫色時就不能將第步染上的結(jié)晶紫的顏色脫去,可能會使革蘭陰性菌也出現(xiàn)紫色,誤認(rèn)為革蘭陽性菌。
2、脫色時間 陽性菌透性小,不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色;但這是在固定的時間條件下的結(jié)果,如果延長脫色時間,也會使脫色劑滲透進(jìn)陽性菌的細(xì)胞壁中,使染上的結(jié)晶紫脫去顏色,后染上復(fù)紅的顏色,變成革蘭陰性菌。而脫色時間太短的話又會使陰性菌染上的結(jié)晶紫不能完全脫色,出現(xiàn)紫色,誤認(rèn)為革蘭陽性菌。
3、固定方法 固定不僅能殺死細(xì)菌,改變細(xì)菌對染料的通透性,還能使細(xì)菌吸附在玻片上,保持原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)。固定方法是將干燥后的細(xì)菌涂片以中等速度通過火焰三次,以玻片觸及手背皮膚熱而不燙為宜。但在實(shí)際操作中有的同學(xué)將玻片在火焰上烤的太久,改變了細(xì)菌原有的通透性,會使細(xì)菌的染色性發(fā)生變化。影響了染色的結(jié)果。
細(xì)菌因素
1、細(xì)菌培養(yǎng)時間 細(xì)菌的典型形態(tài)、染色性是在對數(shù)生長期,取這時的細(xì)菌做革蘭染色可以反應(yīng)細(xì)菌的真實(shí)的染色性。如果細(xì)菌培養(yǎng)時間太長,變成了老齡菌,染色性就會發(fā)生變化,可能會使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。
2、培養(yǎng)基的成分 般認(rèn)為革蘭陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物,它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢,不易脫色。但是如果培養(yǎng)基中缺乏核蛋白質(zhì)鎂鹽就不能合成菌體成分的核蛋白質(zhì)鎂鹽,細(xì)菌與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合就不牢固,容易脫色,可能會使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。
染液因素
1、碘液 碘液作為媒染劑能增加染料與被染物的親和力。如果碘液放置時間太長,或經(jīng)日光照射失效,失去媒染劑的作用,就可能使結(jié)晶紫與細(xì)菌結(jié)合的不牢固,容易被脫色,使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。
2、結(jié)晶紫 結(jié)晶紫的濃度太高,就會使染上的顏色不容易被酒精脫色,可能會使革蘭陰性菌染成革蘭陽性菌。
3、酒精 酒精作為脫色劑,革蘭染色的脫色酒精濃度為95% ,在此濃度下革蘭陽性菌染上的結(jié)晶紫不易被脫去,保留紫色,革蘭陰性菌染上的結(jié)晶紫容易被脫去,后呈紅色。但當(dāng)酒精的濃度為70% 時,它的脫色能力強(qiáng),可能使革蘭陽性菌染上的結(jié)晶紫也被脫去,使革蘭陽性菌染成革蘭陰性菌。