使用蘇木素-伊紅染色液注意什么
蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin,HE),種比較簡便、可靠的快速切片染色法,以保證不拖延診斷時間,也是組織學技術的常規(guī)染色方法,而且,為了縮短某些程度的染色時間,通??捎眉訜岬姆椒▉韺崿F(xiàn)。般是將切片或涂片浸在染色液內(nèi),連同染色皿置于37℃或56℃溫箱內(nèi)至所需時間。那么,使用蘇木素-伊紅染色液注意什么?
1.組織切片的脫蠟步驟應徹底,否則無論進行那種染色都會發(fā)生困難。脫蠟時間要充分,若溶蠟劑使用過久應及時更換以免效率降低,若室溫過低,可將溶蠟劑置于溫箱中進行脫蠟。
2.蘇木素染液使用段時間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物,這可能是液體表面的過氧化物,必須過濾除去,以防沉渣污染組織切片。蘇木素液般染過三、四百張切片后,著色力會減弱,著色不鮮艷,呈灰藍色時應及時更換新液。
3.染色的時間長短需依據(jù):染劑對組織的染色作用,室溫條件,切片厚薄,固定液的類別,染液的新舊而進行調節(jié)。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。
4.分化十分重要。分化步驟的準確也是染色成敗的關鍵,若分化失當則必然引起染色不勻或過淡,過深等現(xiàn)象,因此分化后定要鏡檢,觀察胞核是否清晰,胞漿呈淡白色。否則需再次分化,不然旦復染后,組織會呈紫藍色即“藍蓋紅”現(xiàn)象。
5.還原液不宜過濃,若堿性太強易使組織脫落故以淡為宜。
6.伊紅宜淡染,復染過深胞核會不清晰,影響鏡檢。
7.若脫水,透明等步驟不夠徹底,則組織表面會有層霧狀膜。若有這現(xiàn)象,應立即更換純酒精脫水,再次透明。在潮濕的季節(jié)里應注意酒精的濃度、若降低要及時更換。
8.染色后的組織切片、要將組織四周的污染物痕跡擦掉,以免影響美觀。
9.封固劑要適量,滴加時應小心傾滴,蓋玻片要輕輕放置,以免氣泡產(chǎn)生影響鏡檢。蓋玻片大小選擇要合適,般要大于組織塊,以防封蓋不全,蓋玻片要放正,標簽貼牢,編號清楚。從而保證切片的封藏和美觀。
10.染好的切片應妥為保存,更應避免日光照射,否則切片容易褪色。
高質量的HE染色切片不僅僅是染色。它包括許多方面。先,應注意“固定”環(huán)節(jié)。其次,應注意脫水、透明、浸蠟、包埋和切片等步驟,張因固定、脫水等步驟有所缺陷的切片,染色是不可能鮮艷、透明、層次分明的。