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如何調(diào)整巴氏染色液使細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色

文章出處:本站 人氣:1990 發(fā)表時(shí)間:2021-03-19 16:07:34

巴氏染色法是脫落細(xì)胞染色中最 好的染色方法。蘇木素染液,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個(gè)過(guò)程稱為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織解離,分化不可過(guò)度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱藍(lán)化作用,一般多用自來(lái)水浸洗即可變藍(lán),也可用溫水(50度溫水最 佳)變藍(lán)。EA50染液的酸堿度對(duì)于巴氏染色的成功起著關(guān)鍵作用,EA50染液由伊紅、亮綠、等染料配成。伊紅、亮綠、橘黃等屬于酸性染料,在溶解媒中其發(fā)色團(tuán)是負(fù)離子部分,發(fā)色團(tuán)可與蛋白質(zhì)中帶正電的氨基結(jié)合,從而是胞漿顯藍(lán)色、綠色、橘黃色或紅色,但蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷的多少是隨溶液的PH值而改變的,在偏堿環(huán)境中,蛋白質(zhì)的羧基游離增多(帶負(fù)電),在偏酸環(huán)境中蛋白質(zhì)氨基游離增多(帶正電),磷鎢酸在染色過(guò)程中,不但作為媒染劑可增加染料的著色力,同時(shí)磷鎢酸與碳酸鋰還是一對(duì)弱酸弱堿,實(shí)際上是一對(duì)緩沖劑,可中和分化及藍(lán)化時(shí)可能留下的少量酸或堿,保證染色達(dá)到理想效果,其適用于上皮細(xì)胞及間皮組織的標(biāo)本,是陰道脫落細(xì)胞檢查中最常用的染色方法,該染色法不但具有顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰、分色明顯、透明度好、胞漿受色鮮艷等特點(diǎn)。

巴氏染色法將胞核染為深藍(lán)色;鱗狀上皮底層、中層及表層角化前細(xì)胞胞質(zhì)染綠色,表層不全角化細(xì)胞胞質(zhì)染粉紅色,完全角化細(xì)胞胞質(zhì)呈桔黃色;細(xì)菌:灰色;滴蟲:淡藍(lán)灰色;黏液:淡藍(lán)色或粉紅色;中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、吞噬細(xì)胞胞質(zhì)均為藍(lán)色;紅細(xì)胞染粉紅色;高分化鱗癌細(xì)胞可染成粉紅色或桔黃色;腺癌胞質(zhì)呈灰藍(lán)色。

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