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革蘭氏染色液使用注意事項(xiàng)以及保存方法?

文章出處:本站 人氣:3724 發(fā)表時(shí)間:2019-11-09 15:22:50

革蘭氏染色液使用注意事項(xiàng)以及保存方法:

用途:革蘭氏染色液用于分子生物學(xué)中的培養(yǎng)

原理:蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法:稱取本品65.0g,加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至50℃左右時(shí),加入過濾除菌的氯霉素50mg,混勻,傾入無菌平皿。

【注意事項(xiàng)】:由于液體培養(yǎng)基不易長期保管,現(xiàn)在均改制成粉末。

培養(yǎng)基有天然、人工兩種革蘭氏染色液般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2~7.4,若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。

革蘭氏染色液的保存

1)干粉,買了后定要保存在4度。有人保存在-20度我認(rèn)為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。

2)配好的無血清培養(yǎng)基定保存在4度,保存不要超過3個(gè)月。用時(shí)根據(jù)提示要加入谷胺酰胺。

3)加入血清的培養(yǎng)基,好保存在4度不要超過1個(gè)月,從時(shí)間太長,活性下降。當(dāng)然稍微長點(diǎn)也不定出問題。但是根據(jù)細(xì)胞而定;如果原代培養(yǎng),好新鮮,如果是腫瘤細(xì)胞,或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。

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