革蘭氏染色液為什么會(huì)有不同的顏色？
假如人們把病菌當(dāng)做是個(gè)雞蛋得話，那麼細(xì)胞壁就好像像蛋殼。它包囊在體細(xì)胞表層，是里側(cè)緊靠細(xì)胞質(zhì)的1個(gè)比較堅(jiān)毅、略具延展性的構(gòu)造，具備固定不動(dòng)病菌外觀設(shè)計(jì)和維護(hù)病菌體細(xì)胞等幾種作用。
因?yàn)椴【w細(xì)胞小而全透明，務(wù)必對(duì)它開展染色劑，使染色劑后的菌體與背景圖產(chǎn)生顯著的偏色，進(jìn)而在般光學(xué)顯微鏡下更清晰地觀查其形狀。1884年名美國(guó)大夫C.Gram根據(jù)初染、媒染、褪色和復(fù)染三步實(shí)際操作，將全部病菌區(qū)別為兩類：染色劑反映后呈紫藍(lán)色的稱之為革蘭陽(yáng)型病菌，用G+表達(dá)；染色劑反映后呈鮮紅色的稱之為革蘭呈陰性病菌，用G-表達(dá)。大部分病毒性革蘭陰性桿菌都?xì)w屬于革蘭陽(yáng)性菌，而大部分腸胃菌多歸屬于革蘭陰性菌。病菌對(duì)革蘭染色的不樣反映，我覺得就是說(shuō)因?yàn)榧?xì)胞壁的成份和構(gòu)造不樣而導(dǎo)致的。
不論是革蘭陽(yáng)性菌還是革蘭陰性菌，細(xì)胞壁的關(guān)鍵構(gòu)成是由這種被稱作肽聚糖的化學(xué)物質(zhì)組成。這種化學(xué)物質(zhì)能夠織成1個(gè)反射性較強(qiáng)的多孔結(jié)構(gòu)，即宛如建筑鋼筋骨架圖網(wǎng)組成的片層；終再根據(jù)這種被稱作磷壁酸的化學(xué)物質(zhì)將多孔結(jié)構(gòu)的片層開展互相門鉸鏈，終產(chǎn)生了條很厚病菌“城門”——細(xì)胞壁。雖然體細(xì)胞內(nèi)高血漿滲透壓，體細(xì)胞外低滲的氧分子持續(xù)進(jìn)到體細(xì)胞內(nèi)，但細(xì)胞壁可以把體細(xì)胞牢牢地地箍住，避免體細(xì)胞溶脹裂開。而人們平常根據(jù)食鹽水侵泡方式 來(lái)清洗新鮮水果，或者在高濃的椰子水中侵泡的食材不容易環(huán)境污染病菌，其基本概念就是說(shuō)外界導(dǎo)致的高血漿滲透壓自然環(huán)境，導(dǎo)致體細(xì)胞內(nèi)氧分子向外外滲，造成病菌造成質(zhì)壁瓦解而身亡。
所不樣的是，革蘭陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁簡(jiǎn)易，厚而高密度，高達(dá)20層。肽聚糖占90%，其他的10%為磷壁酸。革蘭陰性菌的細(xì)胞壁薄而繁雜，肽聚糖層僅1到2層，稀少而沖擊韌性差，肽聚糖層外也有脂多糖、不飽和脂肪酸和脂蛋白等化學(xué)物質(zhì)構(gòu)成的外膜，有時(shí)候也稱之為表面。
普遍革蘭陽(yáng)型病菌：有芽胞的鏈球菌，大部分的革蘭陰性桿菌，全部放線菌和細(xì)菌；普遍革蘭呈陰性病菌：弧菌，螺旋體和大部分高致病的無(wú)芽孢桿菌
革蘭氏染色步驟
1、介紹：
革蘭氏染色法歸屬于復(fù)染法，是細(xì)菌學(xué)中普遍的這種鑒別染色法。沒經(jīng)染色劑的病菌，因?yàn)槠渑c周邊環(huán)境折射率區(qū)別不大，故在光學(xué)顯微鏡下不易觀查，染色劑后，病菌與自然環(huán)境產(chǎn)生特的比照，能夠清晰地觀查到病菌的形狀、排序及些特點(diǎn)，用于歸類辨別。
2、試驗(yàn)流程：
革蘭氏染色法通常包含初染、媒染、褪色、復(fù)染等4個(gè)流程，具體步驟方式 是：
1）取載玻片用沙布擦水，載玻片的邊用marker字的筆畫1個(gè)小圈（用于大概明確菌液體的部位）。涂菌的位置在火苗上烤下下，去除植物油脂。
2）抗酸染色：
液體培養(yǎng)液：右手持菌液試管嬰兒，在酒精噴燈火苗周邊5cm上下開啟管蓋；左手持接種環(huán)在火苗中灼燒殺菌，等水冷卻后從試管嬰兒中沾取菌液個(gè)環(huán)節(jié)，在清潔無(wú)脂的載玻片上涂直徑2mm上下的聚氨酯涂料，終將接種環(huán)在火苗上灼燒殺菌（通常狀況下應(yīng)用固態(tài)培養(yǎng)液）。
固態(tài)培養(yǎng)液：先往載玻片上滴幾滴無(wú)菌檢測(cè)水，再用接種環(huán)取小量菌體，涂在載玻片上，使其薄而勻稱。
3）晾曬：讓抗酸染色在氣體中大自然干躁。
4）固定不動(dòng)：讓菌膜朝上，根據(jù)火苗2-3次固定不動(dòng)（以不發(fā)燙為宜）。
5）染色劑：滴加1至2滴革蘭結(jié)晶紫液（Gram Crystal Violet）遮蓋菌膜，染1min，自來(lái)水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
6）媒染：滴加1至2滴革蘭碘液（Gram Iodine）遮蓋菌膜，染1min，自來(lái)水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
7）褪色：持續(xù)滴加95%酒精（Gram Decolorizer 革蘭脫色劑）褪色20-30s至排出液無(wú)藍(lán)紫色，馬上自來(lái)水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
8）復(fù)染：滴加1至2滴革蘭蕃紅（Gram Safranin）復(fù)染1-2min，手洗，汲取殘余水。到此，革蘭氏染色完畢。
9）觀查：用光學(xué)顯微鏡變大陪數(shù)觀查色調(diào)。
3、基本原理：
1）根據(jù)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)產(chǎn)生了不溶解水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物；
2）革蘭氏陽(yáng)性菌因?yàn)槠浼?xì)胞壁過(guò)厚、肽聚糖網(wǎng)層級(jí)較多且化學(xué)交聯(lián)高密度，故遇酒精或甲苯褪色解決時(shí)，因缺水反倒使孔環(huán)變小，加上它沒有類脂，故酒精解決不容易出現(xiàn)間隙，因而可以結(jié)晶紫與碘復(fù)合物緊緊留到壁內(nèi)，使其仍呈藍(lán)紫色；
簡(jiǎn)易了解：革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁類脂含水量低，酒精在褪色時(shí)反倒使細(xì)胞壁脫干進(jìn)而肽聚層直徑變小，減少了細(xì)胞壁的滲透性，進(jìn)而使病菌保存了初染的色調(diào)，紫藍(lán)色；
3）革蘭氏陰性菌以其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含水量高、肽聚糖層薄且化學(xué)交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂主導(dǎo)的外膜快速融解，薄而疏松的肽聚糖網(wǎng)不可以阻攔結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因而根據(jù)酒精褪色后仍呈沒有顏色，再經(jīng)沙黃等鮮紅色染劑復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈鮮紅色；
簡(jiǎn)易了解：革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁類脂含水量高，酒精在褪色時(shí)融解了類脂質(zhì)，提升了細(xì)胞壁的滲透性，進(jìn)而復(fù)合物外滲，再?gòu)?fù)染時(shí)再呈鮮紅色；
4、結(jié)果：
染色劑的差別關(guān)鍵是因?yàn)槌赎幮耘c陽(yáng)型病菌細(xì)胞壁的差別所造成的。革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫藍(lán)色，革蘭氏陰性菌呈鮮紅色。
5、將會(huì)偏差：
在試驗(yàn)中常常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性和假呈陰性的結(jié)果，假陽(yáng)性關(guān)鍵是因?yàn)橥噬粡氐?，將?huì)是因?yàn)榭顾崛旧^(guò)厚，或是是結(jié)晶紫染色劑過(guò)多，造成褪色不徹底。假呈陰性將會(huì)由于體細(xì)胞固定不動(dòng)過(guò)多，導(dǎo)致細(xì)胞壁滲透性的更改，而出現(xiàn)假呈陰性結(jié)果；另個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，將會(huì)早已有部分體細(xì)胞產(chǎn)生身亡或是自溶，也造成細(xì)胞壁滲透性的更改而出現(xiàn)假呈陰性結(jié)果。
