革蘭氏染色液的性能測試注意什么
生物制品,這個域的發(fā)展直都是被大眾所關(guān)注的,而且,革蘭氏染色法是細菌學中普遍使用的種鑒別染色法,這種染色法是由位丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram,1853年-1938年)于1884年所發(fā)明,初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比,能夠清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,而用以分類鑒定。那么,革蘭氏染色液的性能測試注意什么?
外觀控制:制備好的培養(yǎng)基應有相應的顏色,般的培養(yǎng)基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化,會不會蒸發(fā)/脫水。
污染控制:從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
性能測試:
1.測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基*性能的套菌株,應來自國際/標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗規(guī)程》。
2.定量測試方法 改良Miles-Misra法 測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區(qū)域并標記;從*稀釋度開始,分別滴滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區(qū)域;將稀釋液涂滿整個1/4區(qū)域,37°C培養(yǎng)18小時;對易計數(shù)的區(qū)域計數(shù),按公式計算生長率(生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù))。非選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養(yǎng)基應易于目標菌生長;選擇性培養(yǎng)基上目標菌的生長率應不低于0.1。
3.半定量測試方法 改進的劃線法接種法 平板分ABCD四區(qū),共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的半記作0分,分數(shù)加起來得到生長指數(shù)G。目標菌在培養(yǎng)基上應呈現(xiàn)典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數(shù)G大于6時,培養(yǎng)基可接受 。
4.定性測試方法 平板接種觀察法 用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物,在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標準中規(guī)定的培養(yǎng)時間和溫度對接種后的平板進行培養(yǎng),目標菌應呈現(xiàn)良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài),非目標菌應是微弱生長或無生長 。
革蘭氏染色液的質(zhì)量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關(guān)檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何個環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題,都將導致檢驗結(jié)果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養(yǎng)基的實驗室質(zhì)量控制,認真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作,不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。